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檢測試劑盒為何會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
點(diǎn)擊次數(shù):771 更新時(shí)間:2019-04-23
  檢測試劑盒為何會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  檢測試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種高敏感性的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
  應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
  檢測試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。
  檢測試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:
  1.內(nèi)源性物質(zhì)
  普遍認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:補(bǔ)體、嗜異性抗體等。
  (1)補(bǔ)體
  檢測試劑盒中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
 ?。?)嗜異性抗體
  人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
  2.外源性物質(zhì)
  外源性物質(zhì)常常是由于用于檢測試劑盒的血標(biāo)本的采集、貯存不當(dāng)?shù)仍蛩?。如?biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染等。
 ?。?)標(biāo)本溶血
  由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾,標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
 ?。?)標(biāo)本受細(xì)菌污染
  因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本和溶血標(biāo)本一樣,可產(chǎn)生非特異性顯色干擾測定結(jié)果。
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